تخلیص ایزوآنزیم vi اکتینیدین به روش کروماتوفوکوسینگ و مطالعه اثر کلسیم برعملکرد و ساختار آنزیم

آنزیم اکتینیدین (ec 3.4.22.14) یک سیستئین پپتیداز است که از میوه کیوی تخلیص می شود و عضو خانواده بزرگ پاپایین می باشد. دارای حداقل 6 ایزوآنزیم با وزن مولکولی مشابه اما نقاط ایزوالکتریک (pi) متفاوت می باشد. اکتینیدین در صنایع غذایی ،کارهای تحقیقاتی و جداسازی سلول ها کاربرد دارد. پس از تخلیص آنزیم با استفاده از کروماتوگرافی تعویض یونی، برای جداسازی ایزوآنزیم ?v از کروماتوفوکوسینگ استفاده شد و ایزوآنزیم ها براساس تفاوت نقطه ایزوالکتریک از هم جدا شدند. به دلیل حضور قابل توجه یون کلسیم در محیط های زیستی، در این تحقیق اثر یون کلسیم بر روی ساختار و عملکرد ایزوآنزیم vi اکتینیدین توسط روش های مختلف از جمله اسپکتروسکوپی مرئی- فرابنفش، فلوئورسانس ذاتی و دورنگ نمایی دورانی (cd) مورد بررسی قرار گرفت. نتایج سینتیکی نشان داد که کلسیم فعالیت استرازی اکتینیدین را به صورت مهار مخلوط با ki برابر 7/8 میلی مولار و kiبرابر 23/10 میلی مولار مهار می کند. طیف نشر فلوئورسانس آنزیم در حضور یون کلسیم افزایش یافت. داده های فلوئورسانس نشان داد که اثر کلسیم ویژه نبوده و بایستی ناشی از قدرت یونی باشد. به علاوه داده های فلوئورسانس پیشنهاد می کنند که کلسیم موجب جابجایی باقی مانده های تریپتوفان آنزیم به محیط کم قطبی تر می شوندکه با داده های فرابنفش دورcd که نشان دهنده افزایش جزیی در محتوای مارپیچ آلفای آنزیم در حضور کلسیم در تطابق است. همچنین آزمایش های فرابنفش cd نشان دهنده ایجاد قدری فشردگی در ساختار سوم آنزیم بود. می توان نتیجه گرفت که اتصال کلسیم به اکتینیدین موجب مهار آنزیم به صورت مهارشوندگی مخلوط می گردد که همراه با برخی تغییرات در ساختار دوم و سوم آنزیم است.